Western 免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。
為利于更好的實驗效果，不同蛋白，轉膜條件略有不同，今天跟各位同學一起分享下實驗過程中發現的不同蛋白的轉膜條件。
蛋白來源：RAW264.7 總蛋白
蛋白名稱：一些轉錄因子
蛋白分子量：40~70 KD
WB 用膜類型、孔徑：0.45 NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 400 mA
轉膜時間：60~90 min
PS. 其實吧，以我的經驗來看，除非目的蛋白特別小，或者特別大，不然轉膜時間真的不是那么重要， 曾經因為失誤，轉了 15 min 就拆下來了，但從麗春紅染色來看，跟平常實驗也沒有太大的區別。
蛋白來源：內皮細胞 總蛋白
蛋白名稱：occludin & AKT
蛋白分子量：65 KD & 56 KD
WB 用膜類型、孔徑：0.45 PVDF
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓 100 V
轉膜時間：60~70 min
設備名字是「Bio-Rad mini」。
蛋白來源：腫瘤手術標本
蛋白名稱：轉錄因子
蛋白分子量：33 KDa
WB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：350 mA 恒流
轉膜時間：150 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
說明：相同條件曾用于數個 30-70 KDa 的蛋白，都能成功轉上，不過沒有試縮短時間效果如何； 實驗時沒為轉膜條件苦惱，倒是電泳時膠的濃度及時間根據不同分子量而有區別。
蛋白來源：成纖維細胞
蛋白名稱：smad3
蛋白分子量：54 KDa
WB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：350 mA 恒流
轉膜時間：150 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：腫瘤細胞
蛋白名稱：磷酸化蛋白
蛋白分子量：10-200 KDa
WB 用膜類型、孔徑：millipore PVDF 膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：120 v 恒壓
轉膜時間：120 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
建議：轉膜緩沖液只用 2 次，基本都轉上，5%BSA 封閉，減少背景。
蛋白來源：Hepg2
蛋白名稱：EGFR
蛋白分子量：170kd
WB 用膜類型、孔徑：pvdf 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：24V
轉膜時間：2 個半小時
轉膜設備：伯樂半干轉
蛋白來源：肝癌細胞
蛋白名稱：HIF-1α
蛋白分子量：120 kD
WB 用膜類型、孔徑：NC 膜
轉膜方式（恒壓）：80 伏，濕轉
轉膜時間：150 分鐘
設備：「Bio-Rad mini」
建 議：濕轉，轉膜液特別重要，否則會導致電壓或者電流不穩影響轉膜條帶。轉膜均現配先用，不重復利用。轉膜時間一般是 150 分鐘，80 伏恒壓。經李春紅染 色，靠近蛋白膠的一側膜上蛋白染色深，膜另外一面染色淺，說明蛋白未轉過。該濕轉條件自己做過的蛋白分子量范圍：170-36 kD。
蛋白來源：肺臟
蛋白名稱：ICAM-1
蛋白分子量：85~110 KD
WB 用膜類型、孔徑：0.22NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 300 mA
轉膜時間：120 min
設備名字 Bio-Rad mini
一抗用的 santa cruz 1 mL 包裝的。 比例調整到 1：800 做出很好的條帶。 效價會一直降低的。去年做的這個指標，今年夏天做就不行了。
蛋白來源：人腫瘤細胞
蛋白名稱：磷酸化蛋白
蛋白分子量：30-60 KDa
WB 用膜類型、孔徑：pall NC 膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜
轉膜時間：60-90 min
建議：轉膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成 2 倍的母液，轉膜液的多少會影響電轉的效率，一般將吸水紙潤濕即可，不要和膜一起浸泡，這樣效果很好。
蛋白來源：人肝癌腫瘤細胞
蛋白名稱：notch
蛋白分子量：60-120 KDa
WB 用膜類型、孔徑：pall NC 膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流 0.3 A
轉膜時間：-20 度冰柜 120 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad
建議：轉膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成 10 倍或 5 倍的母液，保持低溫是轉膜效果的一個保證，這樣效果很好。
蛋白來源：肺臟、肝臟等。
蛋白名稱：actin
蛋白分子量：43 kD
WB 用膜類型、孔徑：NC 膜 PALL 0.22 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 200 mA
轉膜時間：45~60 min
設備名字 Bio-Rad mini
用的 santa cruz 分裝和整裝的都可以。效價一般 1：1000-1：3000 左右，可穩定較長一段時間。
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蛋白來源：細菌蛋白
蛋白名稱：全部的可溶性蛋白
蛋白分子量：11-170 KD
WB 用膜類型、孔徑：0.45 NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 300 mA
轉膜時間：80 min
蛋白來源：骨肉瘤 CELL LINE
蛋白名稱：Beta actin
蛋白分子量：42 kDa
WB 用膜類型、孔徑：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size (Invitrogen)
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒壓 22 v
轉膜時間：90 min
轉膜設備：X-cell Sure Lock Mini-cell (Invitrogen)
建議改進方向：轉膜過程冰水浴，保持低溫，Transfer Buffer 重復使用。
蛋白來源：腎瘤細胞
蛋白分子量：39 kDa
WB 用膜類型、孔徑：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size (Invitrogen)
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓 100 v
轉膜時間：50 min
蛋白來源：pichia 分泌表達
蛋白名稱：細胞因子等
蛋白分子量：17 到 30 kDa
WB 用膜類型、孔徑：millipore PVDF 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓：100 V
轉膜時間：60 min
這個條件除了 100 KDa 的預染 maker 轉的不好，剩下的條帶都非常清晰。正向前面 ycwzq 說的，感覺時間不是很重要，只要蛋白別太小或太大，在一個比較寬的時間和電壓范圍都能轉上。當然這些還有一個重要的影響因素就是所用的蛋白轉印緩沖液。
蛋白來源：小鼠前列腺癌細胞
蛋白名稱：P53 P21 RAD51 GAPDH
蛋白分子量：53 KDa、21 KDa、37 KDa、36 KDa
WB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 110 v
轉膜時間：60 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad mini
蛋白來源： 來自 MDCK 增殖的流感病毒裂解物
蛋白名稱：PB1
蛋白分子量： 96 kd（注意，10% SDS-PAGE，冰上電泳。用預染 marker 觀察 100kd 的條帶跑到膠的正中間位置時，才開始轉膜，否則轉膜效率降低）
WB 用膜類型、孔徑： NC 膜， 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓，100V
轉膜時間： 2 hours
轉膜設備: BIO-rad 轉膜設備。其間，準備一個冰盒，將
電泳槽半埋到冰里。
轉膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加 SDS 以及多大質量濃度等）： 2.9 g 甘氨酸，5.8 g tris，0.37 g SDS，200 ml 甲醇。
蛋白來源： 軟骨細胞
蛋白名稱：b-actin
蛋白分子量： 43 kd
WB 用膜類型、孔徑： PVDF 膜， 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒流，350 mA
轉膜時間： 85 min
轉膜設備: BIO-rad 轉膜設備。其間，準備一個冰盒，將
電泳槽半埋到冰里。
轉膜液的配制：（2.92 g 甘氨酸，5.8 g tris，0.375 g SDS，200 ml 甲醇，用雙蒸水定容到 1 L）
蛋白來源：HepG2 細胞
蛋白名稱：Akt 及 P-Akt
蛋白分子量：55KDa/56KD
WB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜 0.45 孔徑
轉膜方式（恒壓、恒流）：100V 恒壓
轉膜時間：75 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：大鼠
蛋白名稱：Bactin（42 KDa）
WB 用膜類型、孔徑：PVDF（0.45）膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 150 mA
轉膜時間：100 min
蛋白來源： 大鼠大腦皮質
蛋白名稱：b-actin
蛋白分子量： 43 kd
WB 用膜類型、孔徑： PVDF 膜， 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉，恒流，2 mA/cm2
轉膜時間： 8-55 min
轉膜設備: BIO-rad 轉膜設備。
轉膜液的配制：（2.92 g 甘氨酸，5.8 g tris，0.375 gSDS，200 ml 甲醇，用雙蒸水定容到 1 L）
