制膠及電泳 

（1）膠板的準備：首先確定兩塊玻璃板是否平整，用去污劑和清水將玻璃板洗滌干凈，并用蒸餾水沖洗，晾干后用95%乙醇擦拭。 

1 用1～2 ml 95%的乙醇依次將長玻璃和短玻璃的正面擦拭干凈、均勻；（以平整、光滑的一面為正面）（**次用的玻璃板**好擦2～3次） 

2 用加樣槍取1ml配置好的親和硅烷均勻分布于長玻璃的正面，用紗布涂抹均勻；（**次用的玻璃板**好用親和硅烷擦2～3次） 

3 用加樣槍取0.5～1ml配置好的剝離硅烷均勻分布于長玻璃的正面，用紗布涂抹均勻；（擦**感覺特別光滑為止） 

4 用1ml 95%的乙醇依次將長玻璃和短玻璃的正面擦拭均勻；（可使親和硅烷和剝離硅烷分布更未均勻，也可擦去多余部分） 

5 檢查玻璃板正面有誤紗布絨毛之類的異物，若有，可吹走；取0.4mm的邊條，用紗布擦凈，置于長玻璃板的左右兩側，靠邊放置，將短玻璃板壓于長玻璃板上，調整邊條和短玻璃板的位置，使邊條剛好處于邊緣位置，但不突出，且長短玻璃板剛好對其，用夾子固定住玻璃板的兩側；以1×TAE配制1%瓊脂糖凝膠并封住玻璃板底部，待凝膠凝固后用醫用膠帶密封；將玻璃板凹槽向上小角度傾斜放置，準備灌膠。 

（2）制膠：稱取尿素21g，加入17ml雙蒸水加熱約二三十秒溶解，待冷卻后加入10ml 5×TBE，冰浴**冰手時加入7.5ml 40%丙烯酰胺（19:1），然后加入225μl 10%過硫酸銨和50μl TEMED，快速混勻，準備灌膠。 

（3）灌膠：用5ml加樣槍將制備好的膠液沿玻璃板中部緩慢加入到膠板玻璃板之間的空隙，注意不能在膠中形成氣泡（要多次實驗以掌握技巧、控制加樣速度、調節玻璃板傾斜度、手按、豎起玻璃板、便輕敲變加樣等）。膠灌滿后，將鯊魚齒的平端插入膠液下5mm左右（不可過深，以免后面不能加樣；也不可過淺，以免上樣量過小），同時防止梳齒平端下方出現氣泡，于室溫下靜置2h，使膠完全聚合后使用。 

（4）預電泳：撕去膠布，兩端平行用力拔出梳齒，將玻璃板和梳齒上的多余凝膠擦洗干凈，用蒸餾水漂洗玻璃板、梳子。將玻璃板裝到電泳槽上，在下方電泳槽中加入1×TBE**沒過玻璃板下端約1cm，裝好電泳槽，加入1×TBE**沒過玻璃板上端約1.5cm處，用梳齒刮去玻璃板間隙間的碎膠，再用5ml加樣槍將其吹干凈，反轉梳齒，將鯊魚齒插入凝膠膠面下約0.5mm，并用夾子夾緊，梳齒間空隙即為加樣孔。120w恒功率，預電泳30min。 

（5）點樣：點樣前用加樣槍吹吸每個上樣槽，將梳齒間隙間油狀液體吸干凈，以利于樣品更好的沉降。把DNA樣品與上樣緩沖液混合，每個加樣孔加5~7μl的擴增產物。 

（6）電泳：140-160w恒功率電泳，待溴酚藍**膠的四分之三處時（大約需要1.5~2h），終止電泳，回收電泳液（可重復用一段時間，當發現電壓下降很多時要更換電泳液，或者補加蒸餾水可繼續用一段時間），取下膠板，將兩塊玻璃板輕輕分開，凝膠留在長玻璃板上。 銀染顯色 

 6.1 當**染料接近膠底邊緣，電泳結束，也可使**染料跑出；關閉電泳儀，

移去夾子，取下玻璃板，將膠從玻璃板上小心取下，切去一角或兩個角作為記號，以便于辨認，然后開始銀染處理，處理均在搖床上進行，具體步驟如下：